TB-Flow-Assay

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• Material

  Heparin-Blut

  10 mL

• Methode

  Durchflusszytometrie

• Dauer

  2-3 Tage

• Einheit

  TB-Flow Score

• Referenzbereich

  TB-Flow Score <5,5 (In-house Validation)

• Akkreditiert

  Ja

• Allgemeines

  Der TB-Flow Assay dient der Unterscheidung zwischen einer aktiven und einer latenten Tuberkulose (TB)-Infektion mittels Phänotypisierung TB-Antigen-spezifischer CD4+ T-Zellen. Dafür werden Immunzellen aus dem Blut isoliert und mit Tuberkulose-spezifischen Peptiden, die immunogene Regionen der Proteine CFP-10 und ESAT-6 umfassen, oder mit purified protein derivate (PPD) des Tuberkulose-Wildtyp-Erregers stimuliert. ESAT-6 und CFP-10 sind sezernierte Proteine die für Erreger des Myco¬bac¬terium tuberculosis-Komplex spezifisch sind, und werden auch als Antigene für den Interferon-gamma Release Assay (IGRA) verwendet. PPD ist ein Lysat des Tuberkulose-Erregers und wird für den Tuberkulin-Hauttest (TST) verwendet.

  CD4+ T-Zellen, die Bestandteile von PPD oder des ESAT-6/CFP-10-Peptidpools mittels des T-Zell-Rezeptors (TZR) erkannt haben, reagieren mit der Expression des Aktivierungsmarkers CD154 (CD40-Ligand) auf ihrer Oberfläche. Diese Mycobacterium tuberculosis (Mtb)-spezifischen T-Zellen werden auf die Expression weiterer Aktivierungs- (CD38, HLA-DR) und Proliferationsmarker (Ki-67), die auf eine in vivo Immunantwort hinweisen, untersucht. Die relative Anzahl und der Aktivierungszustand dieser antigenspezifischen Zellen werden analysiert und in einem Punktesystem, zusammengefasst. Das Ergebnis, der TB-Flow Score, gibt Aufschluss darüber, ob eine akute TB-Erkrankung oder lediglich eine latente bzw. nicht-aktive TB-Infektion vorliegt.

  Phänotypisierung TB-spezifischer CD4+ T-Zellen mittels der Quantifizierung Aktivierungsmarker (CD38, Ki-67, HLA-DR) tragender CD4-T-Zellen nach in-vitro Stimulation mit TB-Antigenen.

• Indikation

  -Differenzierung zwischen latenter und aktiver Tuberkulose-Infektion
  -Diagnose einer TB-Erkrankung (aktiver Tuberkuloseinfektion)

• Praeanalytik

  Probenmaterial:
  10 ml Heparin-Vollblut, bei Lymphopenie entsprechend mehr
  Probentransport:
  Transport maximal innerhalb von 8 Stunden zu Labor Berlin. Der Transport erfolgt bei Raumtemperatur.

• Bewertung

  Die schriftliche Befundmitteilung auf die Station erfolgt in der Regel am Tag der Auswertung, spätestens 2 Tage nach dem Materialeingang bei Labor Berlin.

  Parallel zu den Stimulationsansätzen mit TB-Antigenen werden eine Negativkontrolle und eine Positivkontrolle (Mitogen) durchgeführt, um sowohl verminderte T-Zell-Aktivierbarkeit als auch eine unspezifische T-Zell-Aktivierung auszuschließen. Die relative Häufigkeit von PPD- und ESAT-6/CFP-10-spezifischen CD4+ T-Zellen, die CD38, HLA-DR oder Ki-67 exprimieren, wird mit der Negativkontrolle verrechnet und mit markerspezifischen Grenzwerten abgeglichen. Aus der Anzahl der überschrittenen Grenzwerte wird der TB-Flow Score gebildet, dessen Wert auf eine latente oder eine aktive Tuberkulose-Infektion schließen lässt.

  semiquantitativ

• Durchfuehrung

  nur nach telefonischer Terminabsprache (030) 40 50 260470
  Montag – Donnerstag