Autoimmundiagnostik

Zurzeit bestimmt die Autoimmundiagnostik rund 140 Parameter mittels folgender Methoden:

• Immunfluoreszenz
• ELISA
• Immunoblot
• PCR
• Mikroarray

Die Ausstattung umfasst alle Geräte, die zur Parameterbestimmung nötig sind, zum Beispiel:

• Immunfluoreszenz-Mikroskopie (IF)
• Automatische Vorbereitung von Objektträgern  zur IF-Mikroskopie
• Aklides (zur elektronischen Auswertung von IF-Slides)
• Mikrotiterplatten-Reader
• Laborautomaten
• ELISA
• Blot-Master
• Blot-Scanner
• PCR-Cycler
• Microarray-Scanner

Interpretation der Messergebnisse

Das Prinzip immunologischer Nachweistechniken, die im Bereich Autoimmundiagnostik eingesetzt werden, ist die Antigen-Antikörperreaktion bei der Antigen (Ag) und Antikörper (Ak) eine spezifische, reversible Bindung  eingehen. Zu den Methoden, die aktuell in der Autoimmundiagnostik eingesetzt werden, gehören indirekte Immunfluoreszenz (IIFT), Enzyme-linked Immunoassay (EIA) und Immunoblotting/Line Immunoassay (LIA).

Indirekte Immunfluoreszenz (IIFT)

Diese Methode wird für die Suche von -Antikörpern eingesetzt. Als Antigen-Substrate dienen Zellkulturen (z.B. Hep2-Tellen für den ANA-Suchtest, Neutrophile für den Nachweis von ANCA) oder ausgewählte Gewebeschnitte. Bei einigen Antikörpern wird eine Stufendiagnostik durchgeführt, nach einem positiven Suchtest folgt eine Titer-Bestimmung, die Ergebnisse sind semiquantitativ.

Positive ANA und ihr Fluoreszenzenz-Muster sind ein richtungsweisender Befund, im Rahmen der Differentialdiagnostik sollte eine weitere Differenzierung anhand der Antigenspezifität mit weiteren Methoden folgen. Für die Bewertung im Zeitverlauf wird eine Abweichung von mehr als zwei Titer-Stufen als signifikant betrachtet.

Enzyme-linked Immunoassay (EIA)

Meistens sensitiver als die IIFT, was mit einem Verlust an Spezifität verbunden sein kann. Ergebnisse können von denen, die mit einer anderen Methode bestimmt wurden, abweichen. Die Bedeutung der unterschiedlichen Methoden und deren Ergebnisse muss immer mit dem klinischen Bild des Patienten beurteilt werden, da die Struktur bzw. Präsentation des Antigens je nach Methode so wie der zeitliche Verlauf und Höhe von Antikörpern, bzw. deren Abfall und Anstieg, individuell variieren kann.

Immunoblotting, Line Immunoassay (LIA)

Diese Methode kann hilfreich sein, wenn mehrere Antikörper gleichzeitig wie z. B. onkoneuronale Antikörper nachgewiesen werden sollen. Die Ergebnisse, die mit dieser Methode erzielt werden, sind quantitativ ggf. semiquantitativ:
–             negativ

(+)         fraglich/grenzwertig

+            schwach positiv

++         positiv

+++       stark positiv

Prinzipiell bedeutet eine höhere Sensitivität der Laboruntersuchungen auch eine höhere diagnostische Sensitivität, gleichzeitig aber auch eine niedrigere Spezifität. Bei der Bewertung muss berücksichtigt werden, dass aktuell keine Goldstandard-Methode in diesem Bereich der Diagnostik existiert. Die fehlende Standardisierung der Methoden kann unterschiedliche Ergebnisse in verschiedenen Laboratorien und große Unterschiede bei der Durchführung externer Qualitätskontrollen (Ringversuche) verursachen. Darüber hinaus sind die einzelnen Methoden in der Aussagekraft nicht vergleichbar.

Für die Verlaufsbeurteilung ist die kritische Differenz, die von der Präzision der Methode (Standartabweichung, SD) abhängig ist, von großer Bedeutung. Der Unterschied zwischen zwei Bestimmungen kann als statistisch signifikant bezeichnet werden, wenn sich zwei Messergebnisse um mindestens +3SD unterscheiden.

Zusammengefasst ist für die Diagnose der Einsatz verschiedener Methoden, die sich ergänzen können, erforderlich. Eine effektive und erfolgreiche Diagnostik kann nur mit Hilfe einer Verknüpfung zwischen Patienten, Arzt und Labor erreicht werden, wobei die klinische Manifestation der Erkrankung eine wesentliche Rolle in der Interpretation der Laborergebnisse spielt.

 

Literatur:

K. Dörner: Klinische Chemie und Hämatologie, 2009
A. Hall et al.: Clinical Immunology, Fundamental of Biomedical Science, 2016
B. Neumeister, B. O. Böhm: Klinikleitfaden: Labordiagnostik, 2015
K. M. Pollard: Autoantibodies and Autoimmunity, 2006
G. Spickett: Oxford Handbook of Clinical Immunology and allergy, 2020

Kontakt: autoimmun@laborberlin.com

Eingebunden in die Forschung

Der Fachbereich Autoimmundiagnostik ist an zahlreichen Forschungsvorhaben im Klinik- und Industriesektor beteiligt. Im Rahmen dieser Projekte sind neue wichtige Assays zur Autoantikörper-Bestimmung entstanden, so etwa:

• Anti-MCV-ELISA
• POCT-Assay RheumaChec
• Anti-dsDNA-ELISA
• Anti-PR3-hn-hr-ELISA
• Epitopmapping zur Therapieüberwachung von Biologicals bei der Rheumatoide Arthritis (RA)

Bei der nationalen Multizenterstudie Hit-Hard, die von der Medizinischen Klinik mit Schwerpunkt Rheumatologie und Klinische Immunologie ins Leben gerufen wurde, das  Referenzlabor. Außerdem ist das Labor Bestandteil von zwei Forschungsverbund–Projekten und leistet Beträge im Rahmen zahlreicher Therapie-Studien.